大量培養(yǎng)動物細(xì)胞的方法可分為兩種:
①懸浮培養(yǎng),淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等能在液體培養(yǎng)基中懸浮生長。懸浮培養(yǎng)系統(tǒng),工業(yè)放大容易,成本低,不易受污染,可在帶螺旋槳或平槳攪拌的通用發(fā)酵罐中進行。
②大多數(shù)動物細(xì)胞需要附著在一定的固定表面上才能增殖,因此稱單層培養(yǎng)。單層培養(yǎng)的突出問題是提供細(xì)胞生長所需的表面積。迄今為止應(yīng)用最guang泛的是滾瓶法,滾瓶是平放的玻璃瓶,內(nèi)盛培養(yǎng)基,細(xì)胞在其內(nèi)壁上附著生長,隨著瓶子滾動細(xì)胞間歇地接觸空氣和培養(yǎng)基。此外,最you效地提供比表面積(表面積/培養(yǎng)基體積)的是微珠法。微珠的直徑為40~250μm,當(dāng)1mg微珠懸浮在1ml培養(yǎng)基上時,能提供的表面積大于5cm2。另一種能提供較大的比表面積的載體為中空纖維,一般結(jié)構(gòu)是把纖維管束裝置在圓筒內(nèi),培養(yǎng)基一般在管間流動,細(xì)胞在管內(nèi)外壁表面上生長,氣體可通過中空纖維管擴散至培養(yǎng)基中。
如何判斷一種細(xì)胞的生存狀態(tài)好壞
貼壁細(xì)胞在生長狀態(tài)良好時,細(xì)胞均質(zhì)而透明,細(xì)胞內(nèi)顆粒少,看不到空泡,細(xì)胞邊緣清楚,培養(yǎng)基內(nèi)看不到懸浮的細(xì)胞和碎片,培養(yǎng)液清澈透明。