微生物在自然界中呈混雜狀態存在,要獲得所需菌種,必需從中把它們分離出來。在保存菌種時不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多,但基本原理卻是相似的,即將待分離的樣品進行一定的稀釋,并使微生物的細胞(或孢子)盡量以分散狀態存在,然后使其長成一個個純種單菌落。然而上述工作又離不開接種,即將一種微生物移到另一滅過菌的培養基上的過程。
在接種的過程中需要注意哪些問題呢?
(1)接種室應保持清潔,用煤粉酚皂液擦洗臺面及墻壁,定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前,均應用紫外燈滅菌。定期對接種室作無菌程度的檢查。
(2)進入接種室前,應先做好個人衛生工作,在緩沖間內要更換工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只準在接種室內使用。不準穿到其它地方去,并要定期更換、消毒。
(3)接種的試管、三角并瓶等應做好標記,注明培養基、菌種的名稱、日期。移入接種室內的所有物品,均須在緩沖室用70%酒精擦試干凈。
(4)接種前,雙手用70%酒精或新潔爾消毒,操作過程不離開酒精燈火焰;棉塞不亂放;接種工具使用前后均需火焰滅菌。
(5)恒溫培養箱應經常清潔消毒。
微生物實驗操作中注意事項
1.由被檢驗標本或培養物中取材觀察細菌形態時,必須使用接種環。接種環系采用一段長約5 ~8cm 硬度適中的鎳質電阻絲或特制鉑絲,安置在一金屬或玻璃棒上制成。無環者則稱接種針。
2.接種環或接種針每次使用前后,均須火焰滅菌。即在乙醇燈火焰上徹di燒灼1 次,金屬棒或玻璃棒部分亦須轉動著通過火焰3 次,用后燒灼時,先將近環處鎳絲置于火焰中,使熱導向接種環,如直接將環燒灼,則環上殘余菌液可因突然受高熱而爆烈四濺,有傳染危險。待環上菌液蒸發干涸后,再將接種環以垂直方向于火焰中燒灼滅菌,zui后再將金屬棒或玻璃棒部分往復通過火焰。接種針用后滅菌時與接種環同。
3.接種環(針)經火焰后,需待冷卻后再沾取標本或放置于工作臺上,以防燙死微生物和燒損桌面。
4.由培養基或試管培養物中沾取標本時,培養瓶口、試管口在打開后及關閉前,應于火焰上通過1 ~2 次,以殺死可能從空氣中落入的雜菌和由培養物而來的致病菌。打開瓶塞或試管塞時,應將棉塞上端夾于手指間適當的位置,不得將棉塞任意放置別處。
5.不染色標本和染色標本觀察后,應立即投入消毒液內滅菌。
6.使用過玻片,務須徹di消除玻片上的染色細菌后再用,否則再次使用時可能做出錯誤診斷。