科學(xué)研究中需要用到各種細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)?zāi)P停@些細(xì)胞系通常可以從各大細(xì)胞庫(kù)獲取。而在收到細(xì)胞庫(kù)寄送來(lái)的常溫細(xì)胞時(shí),常常會(huì)遇到一些問(wèn)題,比如細(xì)胞脫落、皺縮、有黑點(diǎn)。這篇文章將幫助大家解決這些常見(jiàn)問(wèn)題。
1、收貨時(shí)細(xì)胞脫落
有些細(xì)胞本身貼壁不牢,很容易脫落(如293系列,TM3,TM4,Raw264.7,原代內(nèi)皮細(xì)胞,原代平滑肌細(xì)胞)。
另外,運(yùn)輸過(guò)程中受到碰撞或氣溫過(guò)低,也可能導(dǎo)致細(xì)胞脫落。
處理辦法
① 脫落的細(xì)胞進(jìn)行離心收集,并在離心管中消化。
② 仍然貼壁的細(xì)胞,按照常規(guī)方法加入胰酶或其他解離劑消化。
③ 再將消化好的脫落細(xì)胞和貼壁細(xì)胞混合,按比例接種到新的培養(yǎng)器皿中。
2、 收貨時(shí),細(xì)胞皺縮
運(yùn)輸過(guò)程中,路途顛簸加上溫度不穩(wěn)定,常溫細(xì)胞會(huì)發(fā)生回縮。
處理辦法
放入培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí),若4小時(shí)后仍然沒(méi)有伸展,延長(zhǎng)靜置時(shí)間。注意,過(guò)夜靜置時(shí),需倒出部分培養(yǎng)基,留5-10mL在瓶中,瓶蓋擰松透氣,保持氣體交換(L15培養(yǎng)體系除外)。
若有脫落細(xì)胞,需離心收集。
3、收貨時(shí),細(xì)胞黑點(diǎn)較多
當(dāng)受到運(yùn)輸環(huán)境影響時(shí),細(xì)胞會(huì)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng),分泌活動(dòng)增加,導(dǎo)致分泌蛋白增多,呈黑色圓球狀,分布無(wú)規(guī)律。
同時(shí),路途中凋亡的細(xì)胞碎裂后將產(chǎn)生細(xì)胞碎片,為黑色或透明色,呈不規(guī)則狀,分布無(wú)規(guī)律。
另外,有些細(xì)胞本身分泌活動(dòng)較強(qiáng),培養(yǎng)時(shí)常伴隨黑點(diǎn)。
處理辦法
1.貼壁細(xì)胞放培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)后,正常換液或傳代;
2.懸浮細(xì)胞800~1000rpm(約160~200g) 低速離心3min去除碎片。通常培養(yǎng)數(shù)天后,細(xì)胞狀態(tài)會(huì)逐漸穩(wěn)定下來(lái)。
小貼士:遇到小黑點(diǎn)問(wèn)題時(shí),首先要排除微生物污染,再按以上辦法解決哦~