在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。

一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：
胰蛋白酶消化過度；
支原體污染；
培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；
細(xì)胞老化；
接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。

解決方法：
縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；
分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；
使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；
啟用新的保種細(xì)胞；
調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

二、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢
可能原因：
由于更換不同培養(yǎng)液或血清；
培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；
培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；
試劑保存不當(dāng)；
接種細(xì)胞起始濃度太低；
細(xì)胞已老化；
支原體污染 。

解決方法：
比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；
換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；
用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；
血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；
增加接種細(xì)胞起始濃度；
換用新的保種細(xì)胞；
分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
可能原因：
細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；
細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；
細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；
胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未*分離而成團，細(xì)胞死亡；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。

污染
支原體污染；
霉菌污染。
培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證；
選擇的培養(yǎng)基是否合適；
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。

培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常；
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：
根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案
注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；
避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；
要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗證；
注意實驗室的環(huán)境。

四、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：
培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；
培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；
細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；
培養(yǎng)液滲透壓不正確；
培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

解決方法：
檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；
檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；
取新的保存細(xì)胞種；
檢測培養(yǎng)液滲透壓；
換入新鮮培養(yǎng)液。